NATTOQUINASA: ÚLTIMAS INVESTIGACIONES PARA EL TRATAMIENTO POST VACUNA COVID
Efecto degradante de la nattoquinasa en la proteína Spike
La degradación de la proteína Spike puede ser una estrategia prometedora para prevenir la infección viral y, por lo tanto, se están estudiando muchos agentes que pueden degradar la proteína S. Uno de estos agentes es la nattoquinasa,
La Natookinasa es una enzima natural que se encuentra en el alimento tradicional japonés llamado Natto, que se elabora a partir de la fermentación de la soja. Es una enzima que pertenece a la familia de las serinas proteasas, y tiene la capacidad de degradar proteínas específicas como la Spike.
Asimismo la Nattoquinasa es una enzima que se encuentra naturalmente en el cuerpo humano y se ha utilizado en la medicina tradicional para tratar una variedad de afecciones, incluidas las enfermedades cardiovasculares. En estudios recientes, se ha demostrado que la Natookinasa puede tener un efecto degradante en la proteína Spike.
En el estudio in vitro al que se hace referencia en el enlace adecuado se muestra que la Nattokinasa puede inhibir, la proteína Spike. Los autores del estudio sugieren que la Natookinasa podría ser una alternativa potencial a los tratamientos convencionales para COVID, post vacunas.
Los resultados son prometedores y sugieren que la Natookinasa podría ser una opción terapéutica importante en la lucha contra los efectos adversos post vacunas Covid.
La Natookinasa tiene otros beneficios para la salud, como la reducción de la inflamación, la prevención de enfermedades cardiovasculares y la mejora de la circulación sanguínea. La administración de Natookinasa como tratamiento para COVID-19 aún no está aprobada por las agencias reguladoras de salud.
El hecho de que la Nattokinasa pueda degradar esta proteína puede tener un efecto importante en la prevención y el tratamiento de enfermedades por efectos adversos post vacunas COVID.
Los mecanismos de acción por los cuales la Natookinasa degrada la proteína Spike son los siguientes:
La Natookinasa se une a la proteína Spike: la enzima se une a la proteína Spike de manera específica.
La Natookinasa corta los enlaces peptídicos: Una vez que la Natookinasa se une a la proteína Spike, comienza a cortar los enlaces peptídicos que unen los aminoácidos de la proteína. Los enlaces petídicos son los que mantienen unidos los aminoácidos y forman la estructura de la proteína.
La proteína Spike se degrada en péptidos más pequeños: A medida que la Natookinasa corta los enlaces peptídicos, la proteína Spike se va fragmentando en péptidos más pequeños. Estos péptidos pueden ser menos efectivos en la unión a las células humanas, lo que podría disminuir la capacidad del virus para infectar a las personas.
Los péptidos más pequeños se eliminan: Los péptidos más pequeños generados por la degradación de la proteína Spike pueden ser eliminados por el sistema inmunológico del cuerpo humano.
La nattokinasa es capaz de unirse a la proteína Spike y degradarla en péptidos más pequeños mediante la acción de cortar los enlaces peptídicos.
La sustentabilidad de que la natoquinasa disminuya los niveles de fibrinógeno, factor VII, citoquinas y factor VIII parece estar respaldada por la literatura científica actual.
El fibrinógeno es una proteína que juega un papel importante en la formación de coágulos de sangre, por lo que la disminución de sus niveles puede contribuir a prevenir la coagulación excesiva. De manera similar, el factor VII es una proteína que también está involucrada en el proceso de coagulación, por lo que su disminución también podría ayudar a prevenir la formación de coágulos.
Las citoquinas sabemos que son proteínas que desempeñan un papel importante en la regulación de la respuesta inmunológica y la inflamación en el cuerpo. La disminución de los niveles de citoquinas puede ser beneficiosa en enfermedades autoinmunitarias donde la inflamación es excesiva.
El factor VIII es una proteína necesaria para la coagulación normal de la sangre. Sin embargo, los niveles elevados de factor VIII pueden aumentar el riesgo de formación de coágulos de sangre. Por lo tanto, la disminución de los niveles de factor VIII puede ser beneficiosa para prevenir la formación de coágulos.
En general, la disminución de los niveles de fibrinógeno, factor VII, citoquinas y factor VIII mediante la acción de la nattoquinasa puede tener beneficios terapéuticos en ciertos trastornos como la trombosis o enfermedades autoinmunitarias. La nattoquinasa no debe ser utilizada sin la supervisión de un médico profesional capacitado.
La nattoquinasa inactiva el inhibidor 1 del activador del plasminógeno y aumenta la fibrinólisis, lo que lo convierte en un agente trombolítico eficaz. El plasminógeno es una proteína presente en la sangre que puede ser activada por una enzima llamada activador del plasminógeno para producir plasmina, la cual es responsable de la degradación de los coágulos de sangre. El inhibidor 1 del activador del plasminógeno (PAI-1) es una proteína que inhibe la actividad del activador del plasminógeno, lo que a su vez reduce la capacidad del cuerpo para disolver los coágulos de sangre (trombos).
Su mecanismo de acción se basa en la activación del sistema fibrinolítico endógeno del cuerpo para disolver el coágulo.
Los coágulos de sangre están formados por fibrina, una proteína que se encuentra en la sangre. La fibrina se produce a partir de fibrinógeno, que se convierte en fibrina por la acción de una enzima llamada trombina. Los agentes trombolíticos actúan disolviendo la fibrina del coágulo y, por lo tanto, deshaciendo el coágulo.
La nattoquinasa es conocida por su capacidad para inactivar el inhibidor 1 del activador del plasminógeno y aumentar la actividad fibrinolítica en el cuerpo, lo que significa que puede ayudar a disolver los coágulos de sangre. Por lo tanto, es razonable afirmar que la nattoquinasa puede actuar como un agente trombolítico eficaz.
La nattoquinasa puede tener propiedades anticoagulantes y trombolíticas.
Para analizar el efecto de la nattoquinasa en la proteína Spike, se trataron células HEK293 (línea celular de riñón humano utilizada en investigaciones) con nattoquinasa y se observaron los cambios en la proteína S. fundamentales para comprender el impacto de la nattoquinasa en las células infectadas.
La nattoquinasa también se trató con calor e inhibidores de la proteasa para confirmar la actividad enzimática
Para asegurarse de que la actividad enzimática de la nattoquinasa se mantuviera durante el experimento, los investigadores trataron con calor e inhibidores de proteasa. El calor puede desnaturalizar las enzimas y afectar su actividad, mientras que los inhibidores de la proteasa pueden detener la actividad enzimática. Por lo tanto, este paso ayuda a confirmar que la nattoquinasa utilizada en el experimento estaba activa y funcionando correctamente.
Efectos de la nattoquinasa en RBD de proteína Spike y ACE2
En este paso, se transfirió el dominio de unión al receptor (RBD) de la proteína Spike y plásmidos que codifican ACE2 en células HEK293 para evaluar los efectos de la nattoquinasa en la interacción entre la proteína Spike y el receptor ACE2. Este paso es importante porque el RBD es la parte de la proteína Spike que se une al receptor ACE2, lo que permite que el virus infecte las células. Al analizar cómo afecta la nattoquinasa a esta interacción, se puede comprender mejor cómo la enzima puede inhibir la entrada del virus en las células.
Los lisados celulares se incubaron con nattoquinasa y la nattoquinasa se trataron con calor o inhibidores de proteasa. Se eliminará la pérdida de bandas de proteína con el tratamiento con nattoquinasa, que podría bloquearse con inhibidores de la proteasa. Los lisados celulares se utilizan en la investigación biomédica para estudiar la expresión génica, la regulación de proteínas, la interacción de proteínas y la actividad enzimática en las células. Los lisos celulares son una mezcla de moléculas y orgánulos celulares que se liberan de las células después de que se rompan. Para obtener un liso celular, las células se someten a una serie de procesos físicos y químicos, como la homogeneización, la sonicación o la lisis por congelación y descongelación, para romper la membrana celular y liberar los componentes celulares. Los lisados celulares pueden contener proteínas, ADN, ARN, enzimas, lípidos y otros metabolitos celulares. La sonicación y la lisis son técnicas utilizadas para romper las células y liberar su contenido, lo que se conoce como lisado celular. La sonicación implica la aplicación de ondas sonoras de alta frecuencia a las células, lo que produce la ruptura de las membranas celulares y la liberación del contenido celular. Por otra parte La lisis, implica la adición de productos químicos o enzimas que degradan la membrana celular y liberar el contenido celular. En ambos casos, el objetivo es obtener una muestra homogénea de células rotas y su contenido para su posterior análisis. Estas técnicas en investigación biomédica sirven para obtener proteínas, ácidos nucleicos y otras moléculas celulares a partir de células intactas.
Después de incubarse con la nattoquinasa, los lisados celulares (una mezcla de componentes celulares y fluidos) se analizaron para detectar cambios en la proteína Spike. Efectivamente, se comprobó una pérdida de bandas de proteína con el tratamiento con nattoquinasa, lo que sugiere que la enzima estaba degradando la proteína Spike. Además, los inhibidores de la proteasa bloquean esta degradación, lo que confirma que la actividad enzimática de la nattoquinasa degrada la proteína Spike.
Efectos degradativos de la nattoquinasa en la proteína espiga en la superficie celular transfectada que ha sido manipulada
Finalmente, para demostrar que la Nattokinasa degrada la Spike se transfiriere la proteína Spike en células HEK293 y se trata con nattoquinasa durante 9 horas. La proteína Spike en la superficie celular disminuye con el tratamiento de nattoquinasa, sin causar citotoxicidad ni cambios en la cantidad total de proteína Spike. Esto sugiere que la nattoquinasa tiene un efecto degradativo sobre la proteína Spike en la superficie celular de las células infectadas.
Se evalúa la nattoquinasa mediante el análisis de varianza unidireccional (ANOVA) con la prueba post-hoc de Tukey para comparar la cantidad de proteína Spike presente en las células tratadas con nattoquinasa y las células sin tratamiento. Esta técnica estadística se utiliza para comparar varias muestras y determinar si existe alguna diferencia significativa entre ellas. En este caso, se obtuvo ANOVA para comparar la cantidad de proteína Spike presente en las células tratadas con nattoquinasa y las células sin tratamiento.
La varianza unidireccional (ANOVA) es una técnica que se utiliza cuando se desea evaluar el efecto de una variable independiente (en este caso, el tratamiento con nattoquinasa) sobre una variable dependiente (en este caso, la cantidad de proteína Spike y Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH presente en las células) enzima esencial para la supervivencia celular que participa en la glucólisis, un proceso metabólico que descompone la glucosa para obtener energía en las células. Además, también se ha demostrado que no tiene funciones metabólicas, como su papel en la regulación de la expresión génica y la apoptosis celular.
Los resultados muestran que la nattoquinasa no sólo degrada la proteína Spike, sino también GAPDH, una proteína de mantenimiento celular, aunque la especificidad de proteasa de la nattoquinasa es baja. Esto indica que la nattoquinasa tiene un efecto más amplio en la degradación de proteínas celulares y no solo en la proteína Spike del virus.
Se ha descubierto que la degradación de la proteína Spike por la nattoquinasa es dependiente de la dosis y el tiempo. "Esto significa que la cantidad de nattoquinasa y el tiempo durante el cual las células están expuestas a la enzima afectan la eficacia de la degradación de la proteína S". O sea, la eficacia de la degradación de la proteína Spike depende tanto de la cantidad de nattoquinasa presente en las células como del tiempo de exposición de las células a la enzima. Si se utilizan dosis más altas de nattoquinasa y se extiende el tiempo de exposición, es más probable que se produzca una degradación más completa de la proteína S. Por otro lado, si se usan dosis más bajas y se limita el tiempo de exposición, es menos probable que se produzca una degradación completa.
En particular, se ha observado una degradación significativa de la proteína Spike después de 6 horas de exposición a la nattoquinasa, y esta degradación aumenta de manera proporcional al tiempo de exposición hasta las 24 horas.
Además, al evaluar diferentes cantidades de nattoquinasa, la degradación de la proteína Spike aumenta con la cantidad de enzima presente en el medio de cultivo. En particular, se observa una degradación significativa de la proteína Spike a concentraciones de nattoquinasa de 1 µg/mL o superiores, y esta degradación aumenta de manera proporcional a la concentración de la enzima hasta los 10 µg/mL.
Takashi tanikawa et al. https://www.mdpi.com/1420-3049/27/17/5405
Sumi et al. (1990) "Mejora de la actividad fibrinolítica en plasma mediante la administración oral de natoquinasa"
"Natoquinasa: un agente antitrombótico oral para la prevención de enfermedades cardiovasculares"
Kasono, K. (2017). Nattoquinasa: un agente antitrombótico oral para la prevención de enfermedades cardiovasculares. Diseño farmacéutico actual, 23(7), 1042-1052.